Etanol olarak da bilinen etil alkol, hoş bir kokuya sahip renksiz, yanıcı bir sıvıdır. Bugün farklı kullanımları olan etil alkol ile ilgili tüm soruları sizler için araştırdık. Alkol denilince akla ilk gelen etil alkol hakkında her şey. Feniletil alkol agar: bileşimi, hazırlanması ve kullanımları Feniletil alkol agar bileşikleri Yetiştirme ortamı nasıl ve nerede hazırlanır Organizmaların feniletil alkol agar üzerinde kuluçkalanması Feniletil alkol agarda bazı Gram pozitif ve Gram negatif bakterilerin büyüme tepkisi Kültür ortamı, yapay veya laboratuvar ortamında mikroorganizmaların büyümesini ve çoğalmasını destekleyen önceden tanımlanmış bir malzeme karışımıdır. Kültür ortamları genellikle klinik örnekler, gıda veya çevre gibi çeşitli örneklerden organizmaları izole etmek için kullanılır. Etanol veya tahıl alkolü olarak da adlandırılan etil alkol, alkollere genel adıyla verilen organik bir bileşiktir. Kimyasal formülü C2H5OH olarak bilinen etil alkolün moleküler ağırlığı 46.06844 (232) g/mol'dür. Önemli bir endüstriyel kimyasal olarak kullanılan bu organik bileşik, diğer organik kimyasalların sentezinde, otomotiv endüstrisinde, kozmetik endüstrisinde ve tıpta çözücü olarak yaygın olarak tercih edilmektedir. Etil alkol, zehirli içeceklerin hazırlanmasında da kullanılır. Etil alkol üretimi iki ana süreçten oluşur. Birincisi karbonhidratların fermantasyonu (alkollü içeceklerin yapımında kullanılan yöntem) diğeri ise etilen hidrasyon işlemidir. Fermantasyon, maya hücrelerinin büyümesiyle karbonhidratların etanole dönüştürülmesini içerir. Endüstriyel alkol üretimi için ana fermente edilmiş hammaddeler, pancar ve şeker kamışı gibi şeker mahsullerini ve mısır gibi tahıl mahsullerini içerir. etilen hidrasyonu; Etilen ve buhar karışımının bir asit katalizörü üzerinden yüksek sıcaklık ve basınçta geçirilmesiyle elde edilir. Fermentasyon veya sentez yoluyla üretilen etil alkol, seyreltik bir sulu çözelti olarak elde edilir ve kısmen konsantre edilmelidir. Saf etil alkol, hoş bir eterik koku ve yakıcı tada sahip yanıcı bir sıvıdır. (kaynama noktası 78,5 derece, 173.3 derece Fahrenheit) Orta miktarda etil alkol, kasları gevşeterek, beynin engelleyici aktivitelerini azaltarak belirgin bir uyarıcı etki yaratır. Çok miktarda kullanılırsa koordinasyon ve yargıyı bozarak komaya ve ölüme neden olabilir. Kıvama göre kültür besiyerleri katı, yarı katı ve sıvı olarak sınıflandırılır ve işlevsel olarak diferansiyel, seçici, zenginleştirilmiş ve transfer olarak sınıflandırılabilirler. Daha önce "Kültür besiyeri, mikrobiyolojide değerli bir araç" başlıklı bir yazımızda kültür besiyerini tanıtmıştık. Bu yazımızda bir kültür besiyeri türü olan Feniletil alkol agar hakkında bilgi vermeyi amaçladık. Kültür ortamı mikrobiyolojide değerli bir araçtır Feniletil alkol agar ne zaman kullanılır? Feniletil alkol agar (PEA), bir patojen karışımı içeren bir numuneden Gram pozitif organizmaları, özellikle kokları kültürlemek için kullanılan seçici bir besiyeridir. Feniletil alkoldeki aktif madde, DNA sentezine müdahale ederek gram-negatif organizmaların büyümesini engeller veya azaltırken, gram-pozitif kokların büyümesine izin verir. Örneğin gram pozitif bir organizma olan Staphylococcus aureus feniletil alkol agarda ürerken, gram negatif bir organizma olan Serratia marcescens bu kültür ortamında üremez. Feniletil alkol agar, gram negatif bakterilerin membran geçirgenliğini değiştiren ve büyük miktarlarda hücresel potasyum sızıntısına yol açan ve sonuçta gram negatif bakterilerin DNA sentezinin bozulmasına veya inhibisyonuna yol açan maddeler içerir. Genel olarak feniletil alkol agarın aşağıdaki durumlarda kullanıldığı söylenebilir: Numune kaynağı bir patojen karışımı içeriyorsa (örneğin, gastrointestinal sistem veya periton sıvısı) ve gram boyama, numunenin gram negatif bakteri içerdiğini gösterir. Bu gibi durumlarda, feniletil alkol agar, karışık bakteri florası içeren numunelerde Gram negatif bakterileri ve özellikle Proteus türlerini inhibe eder. Feniletil alkol agar, karışık örneklerde Staphylococcus ve Streptococcus'un seçici büyümesi için kullanılır. %5 koyun kanlı PEA agar, bağırsak örneklerinden Gram pozitif ve Gram negatif anaerobik bakterilerin daha iyi izolasyonu için kullanılır. Bu sayede isteğe bağlı Gram negatif bakterileri inhibe ederek aşırı Proteus ve Clostridium septicum birikimini engeller. Feniletil alkol agar bileşikleri Feniletil alkol agar kültür ortamı, tedarikçilerden karışık bir toz olarak satın alınabilir ve ardından bu agarı içeren bir plaka hazırlamak için üreticinin talimatlarını izleyin. Bu kültür ortamı, önceden yapılmış agar plakaları şeklinde de satın alınabilir. Tablo 1. Feniletil alkol agar bileşikleri Bileşenlerin miktarı (gm/L) 150.0 gr Kazeinin pankreas sindirimi 5.0 gr Soya fasulyesi küspesinin papic sindirimi 5.0 gr Sodyum klorit 15.0 gr ağar 50.0 ml Steril defibrine koyun kanı 2.5 gr β-Feniletil alkol 1 litre Arıtılmış su 25°C'de nihai pH: 7,3 ± 0,2 Yetiştirme ortamı nasıl hazırlanır Anaerobik bakterilerin büyümesini arttırmak için, feniletil alkol (PEA) agar baz ortamına %5 koyun kanı takviyesi eklenebilir. Agar hazırlamak için aşağıdaki adımları izleyin: Malzemeleri bir litre damıtılmış su içinde süspanse edin ve iyice karıştırın. Malzemeleri kısık ateşte karıştırın ve tamamen eriyene kadar 1 dakika kaynatın. Hazırlanan çözeltiyi 121°C'de 15 dakika otoklavlayın. Çözeltinin yaklaşık 45°C'ye soğumasını bekleyin. Aseptik teknik kullanarak, solüsyona %5 steril koyun kanı ekleyin ve tamamen karıştırın. Çözülmüş kültür ortamını steril bir petri kabına (petri kabı başına yaklaşık 20-30 ml) dökün ve katılaşmaya bırakın. Feniletil alkol agarın özellikleri (koyun kanı olmadan) Feniletil alkol agar (koyun kanı ile) Renk biraz donuk ila soluk sarı ve mat kırmızı Hazırlanan petri kabının raf ömrü, kullanımdan önce 4 haftaya kadar buzdolabında saklanabilir. Hazırlanan petri kabı, kullanımdan önce 1 haftaya kadar buzdolabında saklanabilir. Not: Buzdolabında saklanan kültür ortamı, oda sıcaklığına ulaşması için inokülasyondan önce bir süre test ortamına yerleştirilmelidir. Çalışmanın amaçlarına bağlı olarak, istenen mikroorganizmanın kültürünü lineer kültür yöntemi veya başka bir yöntem kullanarak agar yüzeyine aktarın. Organizmaların feniletil alkol agar üzerinde kuluçkalanması Organizmayı feniletil alkol agar üzerinde kültürledikten sonra, 35 ± 2 °C'de 24 ila 48 saat inkübe edin. Çalışmanın amaçlarına bağlı olarak kanlı feniletil alkol agar içeren Petri kapları aerobik, anaerobik ve %5 CO2 atmosferlerinde inkübe edilebilir. Yüksek CO2 atmosferinde inkübasyon, yüksek CO2 konsantrasyonları gerektiren bakterilerin tanımlanmasına izin verir ve ayrıca diğer patojenlerin daha iyi büyümesini destekler. Uygun inkübasyondan sonra, bakteri üremesi agar yüzeyinde bir koloni olarak görülecektir. Gram-pozitif bakteriler iyi bir büyüme gösterirken, Gram-negatif bakterilerin çoğu büyümez veya büyümeleri büyük ölçüde engellenir. Feniletil alkol ağarı Şekil 1. %5 koyun kanı içeren PEA agar Petri kabı, 48 saat 35°C'de inkübe edilmiştir - Sol: Escherichia coli. Sağ: Staphylococcus aureus Feniletil alkol agarda bazı Gram pozitif ve Gram negatif bakterilerin büyüme tepkisi Belirtildiği gibi, feniletil alkol agar, Gram pozitif organizmaların kültivasyonu için uygun bir ortamdır. Ancak tüm mikroorganizmalar aynı kültür ortamında büyümez. Tablo 3, bazı Gram-pozitif ve Gram-negatif bakterilerin bu agar üzerindeki büyüme tepkisini göstermektedir. Organizma Organizmanın türü Büyüme yanıtı Gram negatif Escherichia coli inhibe edilir Gram negatif Enterobacter aerogenes inhibe edilir Gram negatif Proteus mirabilis önemli ölçüde inhibe edilir Gram negatif Pseudomonas aeruginosa kısmen inhibe edilir Engellenmiş Gram-negatif Salmonella enteritidis Gram pozitif Bacillus sp, iyi büyüme Gram pozitif Clostridium perfringens hafifçe inhibe edilir Gram pozitif Enterococcus faecalis iyi büyür Gram pozitif Micrococcus lotus iyi büyür Gram pozitif stafilokok aureus iyi büyür Gram pozitif Streptococcus pneumoniae iyi büyür Gram pozitif Streptococcus pyogenes iyi büyür Feniletil alkol ağarı önemli noktalar Feniletil alkol agar kullanırken, bu %100 agarın kullanılmasının gram pozitif bakterileri ayırt etmeyeceği ve her zaman bir hata yüzdesi olduğu unutulmamalıdır. Örneğin: feniletil alkol agar kullanıldığında bazı gram pozitif koklar hafifçe inhibe edilebilir ve bunların birçoğunun görülmesi ve yeterince büyümesi için 48 saatlik inkübasyon gerekir. Ayrıca Gram negatif bir bakteri  olan Pseudomonas aeruginosa bu besiyerinde inhibe edilmez. Bazen bazı Gram negatif bakteri türleri agar üzerinde küçük koloniler oluşturabilir, ancak genellikle agarın ilk çeyreğinde azalırlar. Çözüm Giriş bölümünde belirtildiği gibi, kültür ortamı, bir yapay veya laboratuvar ortamında mikroorganizmaları büyütmek için kullanılabilecek önceden tanımlanmış bir malzeme kombinasyonudur. Feniletil alkol agar, organizma karışımı içeren bir numunede Gram pozitif organizmaları gözlemlemeye yardımcı olan bir tür seçici kültür ortamıdır. Bu yazımızda bu yetiştirme ortamı hakkında bilgi vermeye çalıştık. Umarız bu makale ilginizi çekmiştir.